Accesorii

De ce sunt folosite medii nutritive elective? Medii nutritive și clasificarea acestora. Cerințe pentru mediile nutritive. Medii pentru creșterea bacteriilor care formează mucus

Cultivarea, diferențierea și izolarea tipurilor individuale de microorganisme au devenit posibile numai cu utilizarea mediilor nutritive. Acestea sunt substanțe speciale care creează condiții favorabile pentru reproducerea și creșterea unui anumit tip de microbi și ciuperci, adică culturi pure, ceea ce deschide posibilitatea studierii proprietăților și efectelor acestora asupra organismului.

Astăzi medii nutritive utilizate atât în medicină, cât și în alte domenii, de exemplu, în industria alimentară, unde sunt utilizate diverse tipuri microorganisme pentru a îmbunătăți calitatea alimentelor, pentru a crește durata de valabilitate, proprietățile gustului și aromei. Astfel, culturile pure izolate prin folosirea mediilor nutritive sunt utilizate în producția de panificație, în industria vinului și a vodcii, la realizarea brânzeturilor și a produselor lactate, la producerea acizilor organici, la fermentarea și conservarea legumelor și fructelor, și în farmacologie.

Cu toate acestea, majoritatea cercetărilor microbiologice au loc în sectorul medical. De aceea, principalii cumpărători de substraturi sunt clinicile și laboratoarele.

Compania BioVitrum este un producător și furnizor de top de echipamente medicale, de diagnostic și de laborator, precum și consumabile. Unul dintre domeniile de activitate este producerea de medii nutritive pentru cultivarea și creșterea microorganismelor. Produsele companiei sunt fabricate din materii prime de înaltă calitate, care conțin componente din sânge de cal și oaie. Avantajul materialului sursă furnizat din Marea Britanie este condițiile speciale în care sunt crescute animalele. Hrana lor nu contine antibiotice, ceea ce asigura ca mediul de crestere este steril.

BioVitrum se oferă să cumpere medii nutritive de toate tipurile care îndeplinesc standardele europene.

Cerințe de mediu

Substraturile produse astăzi și utilizate pentru cultivarea, diferențierea și izolarea microorganismelor trebuie să îndeplinească anumiți indicatori:

Valoarea nutritivă . Mediul este vital pentru nutriție și satisfacerea nevoilor energetice ale culturilor cultivate. Și anume, conține vitamine, substanțe minerale și organice (naturale), microelemente care fac parte din compoziția celulară și activează producția de enzime și aminoacizi care nu sunt produși în mod natural.
Prezența ionilor de hidrogen. Deoarece microorganismele sunt capabile să se hrănească numai dacă membrana celulară este permeabilă, este necesar un echilibru optim al pH-ului pentru a-l asigura.

Pentru microbii patogeni, este necesar un mediu nutritiv ușor alcalin pentru agenții patogeni de tuberculoză, este potrivită o reacție slab acidă.

Mediu tampon. Această proprietate asigură stabilitatea echilibrului pH-ului, neutralizând produșii de descompunere.
Izotonicitatea este un indicator al presiunii în interiorul celulei și în mediu, care ar trebui să fie la același nivel pentru majoritatea microorganismelor.
Sterilitatea mediului. Este important să excludem prezența microbilor străini care pot afecta creșterea culturii de interes.

Mediile trebuie să aibă umiditate, astfel încât mediile dense și uscate necesită pregătire prealabilă. Mass-media trebuie să aibă caracteristici redox și transparență. Un astfel de indicator precum uniformitatea asigură posibilitatea creșterii diferitelor microorganisme.

Clasificare

Fiecare cultură necesită anumite condiții pentru reproducerea celulară abundentă, creștere intensivă și dezvoltare optimă, așa că este dificil să se creeze un mediu universal. În plus, în funcție de obiectivele cercetării, parametrii mediului nutritiv se modifică.

Astăzi, au fost create mai multe tipuri de media cu proprietăți diferite:

Pe baza compoziției componentelor de pornire, acestea sunt clasificate în sintetice și naturale. Acestea din urmă sunt fabricate din materii prime vegetale sau animale. Pentru a reduce costurile, se folosesc produse nealimentare, cum ar fi făina de oase sau cheaguri de sânge coagulați. Cele sintetice sunt obținute din componente organice, adică naturale și minerale.

Pe baza consistenței, mediile sunt împărțite în lichide, dense și semi-lichide. Densitatea este crescută prin adăugarea de gelatină sau agar-agar. Ultimul ingredient nu este un nutrient pentru microbi, sarcina sa este de a crea o densitate optimă. În același timp, temperatura de topire a agarului atinge 80-100 de grade, ceea ce face posibilă creșterea microorganismelor care trebuie să creeze condiții de seră pe mediile care o conțin. Gelatina este o proteină animală, astfel încât substraturile care o conțin pot fi folosite la temperatura camerei. Substanțele dense includ serul de sânge coagulat, albușurile de ou și cartofii. Unele sunt produse sub formă de pulberi și necesită dizolvarea și aducerea la consistența dorită înainte de utilizare.

Compoziția mediilor nutritive poate fi simplă sau complexă. Primele sunt supele de carne peptoide, gelatina hrănitoare, ape peptoide. Al doilea tip, pe lângă componentele inițiale, include substanțe care favorizează creșterea anumitor bacterii. Există, de asemenea, medii speciale folosite în cazul în care creșterea bacteriilor nu este posibilă pe o substanță obișnuită.

Medii nutritive elective. Sunt folosite pentru a izola un anumit tip de bacterii prin inhibarea creșterii altora. Mediile lichide din această categorie sunt numite acumulative.

Mediile de diagnostic diferențial sunt utilizate pentru a izola o cultură pe baza activității sale enzimatice. La transportul materialelor la locul de cercetare se folosesc substraturi de conservare.

Pregătirea mediilor

Precizia rezultatelor obținute depinde de calitatea mediului nutritiv, prin urmare, pe lângă respectarea rețetei, trebuie să respectați următoarele cerințe:

Sterilitatea vaselor. În condițiile de producție, unde producția se realizează pe scară largă, mediile sunt gătite în cazane speciale. În laboratoare, atunci când este necesară obținerea unei cantități mici de medii de cultură, trebuie folosit smalț sau sticlă care nu eliberează acizi și alcalii. Toate rezervoarele sunt mai întâi spălate, clătite și uscate.

Sticlăria nefolosită anterior se sterilizează în acid clorhidric, în care se lasă peste noapte, după care se clătește în conformitate cu regimul stabilit.

Procesul de preparare a mediilor nutritive în sine constă din următorii pași:

Gătitul, care se efectuează fie pe foc și baie de apă (pentru condiții de laborator), fie în cazane și autoclave cu alimentare cu abur (la scară industrială).
Setarea raportului optim al pH-ului necesită utilizarea de indicatori de hârtie, potențiometre și electrozi de sticlă.
Limpezirea se realizează prin introducerea în substrat, bătută cu apă, albușului de ou sau ser de sânge, care în timpul procesului de gătire antrenează particule în suspensie în sediment.
Mediile lichide pe bază de gelatină topită sunt supuse filtrării. În acest scop, se folosesc filtre umede din țesătură și hârtie. Purificarea substraturilor de agar devine semnificativ mai dificilă deoarece componenta principală se întărește rapid. Prin urmare, acest proces este adesea înlocuit cu decontare.
Sterilizarea se efectuează pentru fiecare substrat la o anumită perioadă de timp și la temperatura necesară. Acești parametri sunt indicați în rețeta de preparare.

Etapa finală este ambalarea mediului nutritiv în recipiente - acestea sunt flacoane, eprubete, vase Petri. Vasul se umple doar 2/3 deoarece in timpul sterilizarii mediul creste in volum si poate ajunge la dop, ceea ce va afecta puritatea si proprietatile substratului.

Produsul este turnat folosind pâlnii, seringi, pipete sau alte dispozitive.

Fiecare vas este marcat. Pe vase se aplică numele produsului, se indică cantitatea și data producției.

Mediul finit trece prin mai multe etape de control. Primele teste de sterilitate se efectuează prin plasarea produsului într-un termostat.

Mediul de creștere este trimis la laboratoare pentru testare chimică, al căror scop este stabilirea nivelului exact al pH-ului.

Se efectuează controlul biologic, care constă în determinarea calităților nutriționale ale mediului.

Tipuri de medii de cultură

Pe baza scopului lor, compozițiile de mediu nutritiv produse astăzi pot fi împărțite în următoarele categorii:

Medii universale. Sunt potrivite pentru reproducere diverse tipuri culturile
Medii selective sau selective. Folosit pentru a izola un tip de microorganism.
Medii de diagnostic diferențial care fac posibilă distingerea bacteriilor după proprietățile lor enzimatice, adică produse de deșeuri.
Medii speciale. Sunt folosite pentru cultivarea culturilor care nu se pot reproduce pe substraturi universale.
Mediile selective diferențiale sunt utilizate pentru identificarea rapidă a bacteriilor.
Compoziții medii nutritive semisintetice, care conțin componente de origine naturală.

Compania BioVitrum oferă o gamă largă de medii nutritive, care sunt furnizate atât în flacoane de diferite dimensiuni, cât și în formă finită în vase Petri. Acestea din urma sunt sigilate cu o folie de celuloza special dezvoltata, care asigura un mediu steril si o perioada de valabilitate de pana la 60 de zile.

Avantajul companiei BioVitrum este livrarea promptă, prețurile competitive și conformitatea cu standardele GOST. Toate compozițiile nutritive ale mediului sunt produse în unitățile noastre proprii, echipate cu echipamente de înaltă tehnologie din materii prime Oxoid LTD producător celebru REGATUL UNIT.

La compania BioVitrum puteți achiziționa 18 tipuri de produse prezentate în catalog, care sunt supuse controlului în mai multe etape. Produsele vin cu set complet documentație și marcaje în limba rusă.

Clasificarea mediilor de cultură:

Natural– constau din produse de origine animală sau vegetală și au o compoziție chimică incertă.

De exemplu: sucuri de legume și fructe, țesuturi animale, sânge, lapte, ouă etc. (IPA, MPB). Semisintetic – conține compuși cunoscuți natura chimica

și substanțe cu compoziție incertă. De exemplu: MPB cu glucoză, mediu Endo, mediu Sabouraud. Sintetic

– conțin numai compuși puri din punct de vedere chimic în concentrații precise. Folosit în experimente de laborator. De exemplu: mediul lui Chapek, Omelyansky, Ushinsky etc.

Scopul mediilor de cultură Universal

1. utilizat în cazurile în care microorganismele nu cresc pe medii simple. Acestea includ sânge, agar seric, bulion de zer, bulion ascitic, agar ascitic și altele. Medii elective

- unele microorganisme cresc mai repede și mai intens pe ele decât alte tipuri de bacterii. De exemplu, apa peptonă alcalină 1% este un mediu electiv pentru vibrios holera, mediu Roux și Leffler pentru agenții patogeni difterici. datorită aditivilor selectivi (bile, vopsele, antibiotice etc.) sunt capabili să suprime dezvoltarea unor tipuri de microorganisme, dar nu afectează alte tipuri. Exemple: Mediul Müller este selectiv pentru bacteriile tifoid-paratifoide, agarul furazolidon-tween este selectiv pentru corinebacterii și micrococi. Adăugarea de antibiotice în medii le face selective pentru ciuperci (de ex. mediu Sabouraud etc.).

3. Diagnostic diferenţial- un grup de medii care fac posibilă determinarea proprietăților biochimice ale microorganismelor și diferențierea acestora. Ele sunt împărțite în medii pentru determinarea proprietăților proteolitice, peptolitice, zaharolitice, hemolitice, lipolitice și reducătoare (Endo, Levin, Ploskirev, Gissa media).

4. Conservant (transport) -

concepute pentru a păstra viabilitatea microorganismelor din momentul colectării

biomaterial înainte de cultură pentru diagnostic

Lichid(bulion) – studiul caracteristicilor fiziologice și biochimice și acumularea biomasei de microorganisme

Semilichid(1% agar) – depozitarea culturilor și cultivarea anaerobilor

Dens(3-5% agar) – izolarea culturilor pure, acumulare, înregistrare cantitativă, studiul proprietăților culturale, relații antagonice

În vrac– depozitarea semințelor în industrie (mei, tărâțe)

Uscat– produs de industrie pentru prepararea mediilor nutritive

Sistem de transport cu mediu Stuart

Mediul Stewart este un substrat semisolid, sărac în nutrienți pentru conservarea și transportul unei game largi de microorganisme patogene, cum ar fi Neisseria gonorrhoeae, Haemophilus influenzae, Corynebacterium diphteriae, Trichomonas vaginalis, Streptococcus sp., Salmonella sp., Shigella sp. etc. Cele mai solicitante microorganisme supraviețuiesc în acest mediu mai mult de o zi, altele – până la câteva zile.

Prezența tioglicolatului în mediu suprimă activitatea enzimatică a bacteriilor, iar absența azotului împiedică reproducerea acestora.

Sistem de transport cu mediul Keri Blair

Mediul de transport Keri Blair este o modificare a mediului de transport de bază al lui Stewart, conceput special pentru specimenele fecale.

Glicerofosfat, care este un metabolit al unor enterobacterii ( Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, etc.), înlocuit cu fosfat anorganic,

Albastrul de metilen a fost îndepărtat și pH-ul mediului a fost crescut la 8,4.

Mediul Keri Blair permite conservarea majorității agenților patogeni, inclusiv a microorganismelor pretențioase, cum ar fi Neisseria sp., Haemophilus sp., Streptococcus sp..

Acest mediu este standard pentru transportul anaerobilor.

Sistem de transport cu mediul Ames

Mediul de transport Ames este o altă modificare a mediului de transport de bază Stewart, în care glicerofosfatul este înlocuit cu fosfat anorganic, deoarece glicerofosfatul este un metabolit al unor enterobacterii ( Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, ets.) și poate susține creșterea unor microorganisme gram-negative.

Albastrul de metilen a fost înlocuit cu cărbune activat de calitate farmaceutică.

Se adaugă calciu și magneziu în mediu pentru a menține permeabilitatea celulelor bacteriene.

Acest mediu este capabil să susțină microorganisme precum Neisseria sp., Haemophilus sp., Corynebacteria, Streptococi, Enterobacteriaceae etc., însă, cele mai bune rezultate se obțin prin cultivare în primele 24 de ore.

Medii universale de îmbogățire: Agar peptonă de carne (MPA) și bulion de peptonă de carne (MPB)

Ele sunt principalele medii de inoculare a microorganismelor pentru a verifica puritatea culturilor înainte de biochimică și serotipizare.

Sunt folosite pentru cultivarea și numărarea microorganismelor nepretențioase. Sub formă semi-lichidă, mediul poate fi folosit pentru a stoca microorganismele de control (de referință).

Medii de stocare universale Mediu Hottinger

Proiectat pentru cultivarea diferitelor microorganisme, cum ar fi enterobacterii, Pseudomonas aeruginosa, stafilococi și unele tipuri de streptococi. Dacă este necesar, poate fi îmbogățit cu carbohidrați și săruri.

Conține hidrolizat Hottinger, care se obține prin hidroliza enzimatică a cărnii tocate (vită) cu pancreatină, urmată de filtrare și adăugare de cloroform ca conservant.

Medii de stocare universale:Mediul Mueller-Hinton

Acest mediu este folosit pentru cultivare Neisseria sp.și pentru a determina sensibilitatea microorganismelor la agenții antimicrobieni.

Miercuri McConkey

Mediile MacConkey sunt recomandate ca medii diferențiale pentru izolarea selectivă a enterobacteriilor și a bacililor gram negativi înrudiți.

Tulpinile pozitive pentru lactoză cresc cu colonii roz sau roșii care pot fi înconjurate de o zonă de precipitare a sărurilor biliare.

Culoarea roșie apare ca urmare a acidificării mediului de către produșii de descompunere a lactozei (când pH-ul scade sub 6,8) și a adsorbției roșului neutru.

Tulpinile care nu fermentează lactoza (Shigella, Salmonella) formează de obicei colonii transparente, incolore și nu modifică mediul.

Medii de diagnostic diferențial:Endo mediu

Acest mediu a fost dezvoltat de Endo ca mediu de cultură pentru diferențierea microorganismelor care fermentează și nefermentează lactoza. Este utilizat pentru examinarea microbiologică a apei, apelor uzate, lactatelor și altor produse alimentare.

Sulfitul de sodiu și fucsina bazică au un efect inhibitor asupra microorganismelor gram-pozitive. Lactoza este descompusă de microorganisme în aldehidă și acid.

Medii de diagnostic diferențial:Aldehida, la rândul său, eliberează fuchsină din complexul fucsină-sulfit, sporind culoarea roșie a coloniilor.

La E. coli, această reacție este foarte pronunțată și este însoțită de cristalizarea fuchsinei, care se manifestă printr-o strălucire metalică verzuie (lucire de muchsin) a coloniilor.

Agar cu sare de galbenus

Acest mediu este utilizat ca mediu selectiv pentru izolarea culturilor stafilococice semnificative clinic.

Medii de diagnostic diferențial:Manitolul este un substrat fermentabil și diferențiator, precum și o sursă de carbon.

Adăugarea (până la 5% v/v) de emulsie de gălbenuș de ou face posibilă determinarea activității lipazei microorganismelor. Emulsia într-un mediu salin devine transparentă, prin urmare, în prezența activității lipazei, în jurul coloniilor se formează o zonă opaca galbenă.

Agar Wilson-Blair sau bismut sulfit

Mediu selectiv pentru izolarea Salmonella.

Digestia peptică a țesutului animal și extractul de carne servesc ca sursă de nutrienți azotați, carbon, sulf, vitamine B și oligoelemente necesare pentru creșterea acestor bacterii.

Verdele strălucitor inhibă creșterea tuturor bacteriilor gram-pozitive. Glucoza este un carbohidrat fermentabil.

Sulfatul feros poate detecta producția de hidrogen sulfurat.Bismutul este un metal greu care inhibă creșterea majorității bacteriilor intestinale gram-negative, cu excepția Salmonella.

Salmonella reduce sulfatul feros în prezența glucozei și a sulfitului de bismut la sulfură feroasă, ceea ce înnegrește coloniile lor. Medii elective speciale: Mediul lui Loeffler

O concentrație ridicată în ser ajută la determinarea activității proteolitice a microorganismelor, precum și la formarea pigmentului.

Peptona și extractul de carne oferă microorganismelor nutrienți esențiali. Glucoza este un substrat fermentabil și o sursă de energie.Medii selective speciale:

Kampilobakagar

Mediu selectiv pentru Campylobacter care a constat din bază de agar cu sânge cu sânge de oaie sau sânge de cal și antibiotice. Componentele antimicrobiene inhibă semnificativ creșterea microflorei normale, promovând creșterea și excreția din fecale.

Campylobacter fetus ssp. jejuni

Prezența amfotericinei B în supliment suprimă semnificativ sau complet creșterea ciupercilor introduse ulterior îmbunătățește suprimarea microflorei intestinale normale; Colonii Campylobacter fetus ssp. jejuni

au caracter mucos, cenușiu plat cu contururi neregulate sau înălțate, rotunde, fără hemoliză.

Unele tulpini pot produce colonii galben-maronii sau rozalii.

Pe o suprafață umedă a mediului poate apărea creșterea contopită sau roiul.

La pregătirea mediilor nutritive, este necesar să se țină cont de nevoia de microorganisme cultivate pentru diferiți nutrienți. Există diferite clasificări ale mediilor de cultură.

1. Clasificarea mediilor nutritive după compoziție: Medii simple

(MPB, MPA, gelatină, apă peptonă). Bulionul de carne-peptonă (MPB) este baza proteică a tuturor mediilor.

Există mai multe moduri de a pregăti MPB:

a) pe apă de carne cu adaos de peptonă gata preparată;

b) privind digestia produselor de hidroliză a materiilor prime folosind enzime.

Agar peptonă de carne (MPA) - preparat prin adăugarea de agar-agar (1,5-3%) la MPB. Dacă MPA este distribuit în diagonală pe un tub sau o sticlă, este o agar înclinată. Dacă mediul este distribuit vertical într-o eprubetă cu o înălțime de 5-7 cm, este coloană de agar. MPA, congelat în vase Petri sub formă de pastă - agar pe placă. Dacă mediul are un strat vertical de 2-3 cm înălțime și un strat diagonal de aceeași dimensiune, este o agar semi-înclinată. 2. Medii complexe

preparat simplu cu anumiți aditivi (carbohidrați, sânge, bilă, ouă, zer, lapte, săruri, factori de creștere etc.)

1. Clasificarea mediilor nutritive în funcție de componentele inițiale: Medii de cultură naturală - Asta produs natural

origine animală sau vegetală.

Pot fi:

Animale (produse inițiale - carne, pește, ouă, lapte, țesut animal, bilă, ser sanguin etc.).

Mixt (MPA, mediu Levenshtein-Jensen etc.).

2. Medii construite contin produse naturale procesate (apa de carne, digerat), substante derivate din aceste produse (peptona, extracte de drojdie si porumb) si diversi aditivi. Acesta este cel mai mare și mai divers grup de media ca compoziție. Se prepară după anumite rețete din diverse infuzii sau decocturi de origine animală sau vegetală cu adaos de săruri anorganice, glucide și substanțe azotate.

3. Medii sintetice(famos compozitia chimica) constau din compuși chimic puri în concentrații precis stabilite (cu adaos de carbohidrați, săruri, aminoacizi, vitamine etc.). Pe baza acestor medii, adăugându-le medii naturale sau artificiale, se obțin medii semisintetice.

Clasificarea mediilor nutritive după consistență: sunt medii lichid(medii fără agar), semi-lichid(cu agar până la 1%), dens(agar - 1,5-2,5%). Mediile lichide sunt mai des folosite pentru a studia caracteristicile fiziologice și biochimice ale microorganismelor și pentru a acumula biomasă și produse metabolice. Mediile semi-lichide sunt de obicei folosite pentru depozitarea culturilor, mediile solide pentru izolarea microorganismelor, studierea morfologiei coloniilor, scopuri de diagnostic, înregistrarea cantitativă, determinarea proprietăților antagoniste etc.

Clasificarea mediilor nutritive în funcție de scopul propus: universal (utilizat în mod obișnuit) și special.

Medii universale (de bază). Aceste medii sunt folosite pentru cultivarea celor mai multe microorganisme relativ nepretențioase sau sunt folosite ca bază pentru prepararea mediilor speciale, adăugându-le sânge, zahăr, lapte, zer și alte ingrediente necesare pentru reproducerea unui anumit tip de microorganism. Acest grup include: MPB - bulion de carne-peptonă, MPA - agar peptonă de carne, MPG - gelatină de carne-peptonă etc.

Medii speciale. Conceput pentru izolarea și cultivarea selectivă a anumitor tipuri de microorganisme care nu cresc pe medii simple.

Se disting următoarele tipuri de medii speciale: medii de îmbogățire, medii selective, medii de diagnostic diferențial, medii de conservare și medii de acumulare.

Medii de îmbogățire. Multe microorganisme nu cresc pe medii obișnuite, așa că se adaugă carbohidrați (bulion de zahăr sau agar) sau proteine (agar și bulion din zer, agar și bulion cu sânge) pentru a crește valoarea nutritivă a mediului. Geloza cu sânge sau bulionul de sânge se prepară prin adăugarea a 5-10% sânge defibrinat steril încălzit de oaie, iepure, cal sau om la mediul nutritiv. Mediul este utilizat pentru a izola streptococi, pneumococi și alte bacterii, precum și pentru a studia activitatea hemolitică. Bulionul de zer sau agarul din zer se prepară prin adăugarea a 15-20% ser de cal sau de bovină în mediu simplu.

2. Medii elective (selective). Aceste medii sunt concepute pentru a izola și a acumula în mod selectiv microorganisme de un anumit tip dintr-un material care conține mai multe tipuri de microbi. La însămânțarea materialului care conține un amestec de diferite microorganisme pe ele, va apărea mai întâi creșterea speciilor pentru care acest mediu va fi selectiv. Selectivitatea mediului se realizează prin crearea condițiilor optime pentru cultivarea anumitor microbi (pH, Eh, concentrația de sare, compoziția nutrienților), adică. selecție pozitivă. Sau prin adăugarea de substanțe în mediu care inhibă alte microorganisme (bile, concentrații mari de NaCl, antibiotice etc.), adică. selecție negativă. Acest grup include:

Mediu selenit- este cel mai bun mediu de îmbogățire pentru salmonela și microbii de dizenterie Sonne. Selenitul de sodiu conținut în mediu stimulează creșterea acestor bacterii și inhibă creșterea florei asociate.

Agar sulfit de bismut - contine saruri de bismut, verde stralucitor. Salmonella crește pe acest mediu sub formă de colonii negre. Alte tipuri de bacterii nu cresc pe acest mediu.

Agar cu sare de galbenus (YSA) - mediul pentru izolarea stafilococilor conține până la 10% clorură de sodiu, care suprimă majoritatea bacteriilor conținute în material. În plus, acest mediu este, de asemenea, diagnostic diferențial, deoarece prezența gălbenușului de ou face posibilă detectarea enzimei lecitinaza (lecitovitellase), care este formată din stafilococi patogeni. Lecitinaza descompune lecitina în fosfocoline și acizi grași insolubili în apă, astfel încât mediul din jurul coloniilor pozitive pentru lecitinază devine tulbure și o zonă opalescentă apare sub forma unei „corolei curcubeului”.

Bulion de bilă selectiv pentru salmonella, a cărei reproducere este stimulată de bilă adăugată de 10%, inhibă în același timp creșterea microorganismelor însoțitoare.

Agar alcalin sau apă peptonă alcalină sunt selective pentru Vibrio cholerae, reacția alcalină a mediului (pH 9,0) nu împiedică creșterea Vibrio cholerae, dar inhibă creșterea altor microorganisme. 3-5 zile. ŞI

3. Medii de diagnostic diferenţial. Mediile de diagnostic diferențial sunt utilizate pentru a diferenția un tip de microorganism de altul pe baza naturii activității lor enzimatice. Compoziția acestor medii este selectată astfel încât să identifice în mod clar cele mai caracteristice proprietăți ale unui anumit tip de microorganism, pe baza caracteristicilor metabolismului acestuia.

Medii pentru identificarea capacității proteolitice și hemolitice a microbilor care conțin substanțe proteice: sânge, lapte, gelatină etc. Cele mai comune medii sunt gelatina peptonă din carne (MPG), serul de cal coagulat, laptele și agar-sânge (BA).

Mijloacele pentru studierea proprietăților glicolitice includ trei componente principale: o bază nutritivă (bulion, agar), un substrat (mono și dizaharide, alcooli polihidroxici) și un indicator pentru identificarea enzimelor corespunzătoare. Defalcarea enzimatică a substraturilor duce la o schimbare a pH-ului și o schimbare a culorii mediului. Cele mai frecvente sunt mediile colorate care conțin diverși carbohidrați (de exemplu, albastru de bromotimol, un indicator al TA). De asemenea, sunt utilizate pe scară largă mediile Hiss, care iau în considerare diferențele în capacitatea de a fermenta diferiți carbohidrați cu formarea de acid, sau acid și gaz.

Pentru a diferenția enterobacterii, apa peptonă este utilizată cu un set de diverși carbohidrați, indicator Andrede și flotoare, care facilitează detectarea formării gazelor și ajută la determinarea vizuală a modificării pH-ului caracteristic diferitelor microorganisme. În special, o trecere la partea acidă face ca mediul cu reactiv Andrede să devină roșu sau galben atunci când se folosește un mediu cu albastru de bromotimol, în timp ce atunci când este alcalinizat, indicatorul Andrede și albastrul de bromotimol nu schimbă culoarea mediului. De exemplu, pentru izolarea bacteriilor patogene din intestin, se folosesc medii care fac posibilă diferențierea microorganismelor patogene de locuitorii permanenți ai intestinului - microorganisme care descompun lactoza.

Un astfel de mediu este mediul Endo. Principalele componente ale mediului Endo sunt MPA, lactoza și fucsina bazică, decolorate cu sulfit de sodiu. Mediul nutritiv inițial este colorat în roz deschis. Când lactoza este fermentată, se formează acetaldehidă, care reacționează cu sulfitul și, atunci când este eliberată, fuchsinul colorează coloniile în roșu aprins. Prin urmare, E. coli, care fermentează lactoza, atunci când crește pe acest mediu, formează colonii roșii cu un luciu metalic, în timp ce Salmonella și Shigella sunt incolore, deoarece nu fermentează lactoza.

4. Suporturi de stocare, pe care are loc creşterea rapidă a anumitor tipuri de microorganisme.

5. Medii de conservare (de transport). Conceput pentru a păstra microorganismele în timpul transportului la locul de cercetare. Aceste medii conțin aditivi care previn proliferarea și moartea microbilor, ceea ce ajută la menținerea viabilității acestora. Cele mai multe aplicații a găsit un amestec de glicerol (mediul Teague), un amestec de tampon fosfat și medii Kari-Blair, Amies (cu și fără cărbune activ cărbune activ), Stewart și colab.

Sterilizarea mediilor de cultură.

Toate mediile nutritive, indiferent de scopul lor, sunt turnate în recipiente curate și sterilizate. Majoritatea mediilor sunt sterilizate prin autoclavare, dar în condiții diferite în funcție de compoziția lor.

1. Mediile sintetice și toate mediile de agar care nu conțin proteine native și carbohidrați sunt sterilizate timp de 15-20 de minute într-o autoclavă la o temperatură de 115-120°C și o presiune de 1-1,5 atmosfere.

2. Mediile cu carbohidrați și lapte (care include lactoză), gelatina hrănitoare se sterilizează cu abur curgător la o temperatură de 100°C fracționat sau în autoclavă la 112°C și la o presiune de până la 1 atmosferă.

3. Mediile care conțin substanțe proteice (ser sanguin, lichid ascitic) sunt decontaminate prin tindalizare sau filtrare.

4. Pentru a steriliza mediile de cultură care conțin proteine native, utilizați filtrarea prin filtre cu membrană Seitz.

Pentru a controla sterilitatea mediului după sterilizare, puneți-l într-un termostat la 37°C timp de 3-5 zile. Mediile lichide trebuie să rămână limpezi și nu trebuie să apară semne de creștere pe suprafața sau în grosimea mediilor de cultură solide. Pe lângă controlul sterilității, se efectuează controlul chimic al mediului preparat, care constă în determinarea pH-ului, a cantității de azot și cloruri total și aminic în mai multe probe din fiecare serie.

Există, de asemenea, control biologic al mass-media. În acest caz, mai multe probe din mediu sunt inoculate cu o cultură de laborator a microbilor pentru care este pregătit mediul și se studiază natura creșterii acestuia. Numai după ce mijloacele de informare în masă au trecut de control, acestea pot fi utilizate în scopul propus.

În funcție de scopul propus, mediile nutritive sunt împărțite în următoarele categorii principale.

Scopul mediilor de cultură- medii pe care cresc bine multe tipuri de bacterii patogene și nepatogene. Acestea includ: bulion de carne-peptonă (MPB = apă de carne + 1% peptonă + 0,5% NaCl), agar peptonă de carne (MPA = MPB + 2-3% agar).

Diagnostic diferenţial- medii care fac posibilă distingerea unui tip de bacterii de altul prin activitatea lor enzimatică sau manifestările culturale. Acestea includ Endo, Levin, Ploskirev, Gissa și mulți alții.

Selectiv(sinonime: selectiv, electiv, de îmbogățire) - medii care conțin substanțe utilizate de microorganisme de anumite tipuri și nu favorizează sau chiar împiedică creșterea altor microorganisme. Mediile selective fac posibilă selectarea specifică a anumitor tipuri de bacterii din materialul studiat. Acestea includ Muller's, selenitul, Rapoport, 1% apă peptonă etc.

Diferenţial-selectiv- medii care combină proprietățile de diagnostic diferențial și medii selective. Ele sunt utilizate, în special, pentru a accelera detectarea și identificarea bacteriilor aparținând unui număr mare de specii răspândite de enterobacterii și pseudomonade (mediul Sivolodsky).

(de uz general) - potrivit pentru creșterea multor tipuri de microorganisme și folosit ca bază pentru medii nutritive speciale. Exemple: MPB, MPA, mediu Hottinger, GRM, mediu tioglicolat.- medii special pregatite pentru a obtine cresterea acelor bacterii care nu cresc sau cresc foarte slab pe medii universale. Acestea includ mediul McCoy-Chapin (pentru a obține creșterea agentului cauzal al tularemiei), MPA din sânge (pentru a obține creșterea streptococilor patogeni), mediu Lowenstein-Jensen (pentru a izola agentul cauzal al tuberculozei) etc.

și substanțe cu compoziție incertă. De exemplu: MPB cu glucoză, mediu Endo, mediu Sabouraud.- medii cu compoziție chimică strict definită, care sunt soluții de săruri anorganice cu adaos de compuși chimici, care servesc ca sursă de carbon sau azot. Un exemplu de astfel de mediu sintetic este mediul minim M-9, în care sursa de energie și carbon este glucoza, iar azotul este NH4C1. Mediile sintetice pot avea o compoziție mai complexă cu includerea diferiților aminoacizi, baze și vitamine.

De exemplu: sucuri de legume și fructe, țesuturi animale, sânge, lapte, ouă etc. (IPA, MPB).- medii sintetice la care se adauga un produs de origine naturala, de exemplu ser de sange. Există multe diverse opțiuni medii de cultură concepute pentru a răspunde nevoilor speciilor bacteriene relevante și a scopurilor de diagnosticare.

Motorul electric asincron a4 este conceput pentru a actiona mecanisme care nu necesita reglare a vitezei (ventilatoare, aspiratoare de fum, pompe). Caracteristici distinctive Motoarele din seria A4 și caracteristicile acestora pot fi găsite la

Mediile nutritive sunt destinate acumulării, izolării, studiului și conservării microorganismelor. La prepararea mediilor nutritive artificiale se ține cont atât de nevoile microorganismelor pentru substanțele necesare vieții, cât și de condițiile fizico-chimice în care acestea pot face schimb între celulă și mediu.

Pentru a asigura diverse tipuri de metabolism microbian, mediile nutritive trebuie să îndeplinească următoarele cerințe.

1. Conțin toate elementele din care este construită celula: macroelemente (carbon, azot, oxigen, sulf, fosfor, potasiu, calciu, magneziu, fier) și microelemente (mangan, molibden, zinc, cupru, cobalt, nichel, vanadiu, clor, sodiu, siliciu etc.). Toate elementele trebuie să fie în compuși digerabili de un microorganism specific. Sursa de carbon poate fi variată compuși organici: glucide, alcooli polihidroxici, acizi organici, aminoacizi, proteine etc. Sursa de azot o constituie compusii de amoniu, aminoacizi, peptide, proteine. Sursa macroelementelor rămase sunt compușii anorganici - săruri ale acizilor fosforici și alți acizi. Microelementele pătrund în mediul nutritiv cu substraturi organice, săruri și apă. Vitaminele (în special grupa B) și alți factori de creștere sunt adăugate în mediu ca parte a substraturilor organice sau sub formă de substanțe pure.
2. Să aibă suficientă umiditate (cel puțin 20% apă).
3. Concentrația sărurilor în mediu trebuie să asigure izotonicitate, adică. corespund concentrației de săruri din celula microbiană (pentru majoritatea microorganismelor - 0,5%; halofile - 3%).
4. Concentrația ionilor de hidrogen (pH) ai mediului trebuie să fie optimă pentru microorganismul cultivat (interval pH 4,5-8,5).
5. Potențialul de oxidare-reducere (Eh) al mediului trebuie să corespundă nevoilor microorganismului: pentru anaerobi - 0,120-0,060 V, pentru aerobi - mai mult de 0,080 V.
6. Mediul nutritiv trebuie să fie steril.

Compoziția mediilor nutritive poate fi sintetică sau naturală. Mediile nutritive sunt sintetice dacă conțin numai compuși puri din punct de vedere chimic în dozele prescrise, de exemplu. compoziţia lor este pe deplin cunoscută. Avantajul unor astfel de medii este standardizarea și reproductibilitatea lor. Cu toate acestea, mediile sintetice sunt disponibile doar pentru câteva bacterii patogene. Ele sunt utilizate în principal pentru studii experimentale ale metabolismului microbian.

Mediile naturale sunt utilizate pe scară largă pentru cercetarea practică. Mediile nutritive naturale (naturale) constau din produse de origine animală și vegetală și au o compoziție chimică incertă.

Există diferite medii nutritive scop general medii nutritive (universale) și speciale. Mediile nutritive de uz general sunt potrivite pentru creșterea multor tipuri de microorganisme și pentru utilizare ca bază pentru prepararea mediilor nutritive speciale. Acestea includ, de exemplu, bulion cu extract de carne, agar cu extract de carne, bulion Hottinger, agar Hottinger și altele. Mediile nutritive speciale sunt concepute pentru cultivarea selectivă a anumitor tipuri de microorganisme, studiind proprietățile și depozitarea acestora.

Există următoarele tipuri de medii speciale: electiv (selectiv), diagnostic diferenţial, conservant. Selectivitatea mediului nutritiv pentru anumite tipuri de microbi se realizează prin crearea unor condiții optime pentru aceștia (pH, Eh, concentrația de sare, compoziția nutrienților), adică. selecție pozitivă, sau prin adăugarea de substanțe în mediu care inhibă alți microbi (bile, azidă de sodiu, telurit de potasiu, antibiotice etc.), i.e. selecție negativă. Proprietățile de diferențiere ale mediului nutritiv sunt create prin adăugarea unui substrat la care se determină raportul dintre microbi (de exemplu, zaharuri, aminoacizi) și indicatorii corespunzători (de exemplu, indicatori de pH - bromotimol blau, fuchsin; indicatori Eh).

După consistență, mediile nutritive pot fi lichide, semi-lichid (0,2-0,7% agar) și dens (1,5-2% agar). Mediile de cultură uscate produse industrial sunt o formă de conservare a mediului.

Pentru a oferi tehnologie de microvolum pentru identificarea biochimică a microorganismelor, sunt produse sisteme comerciale de microtestare. Sunt reprezentate de două grupe, care diferă prin conținutul substratului de reacție: 1 - în mediul nutritiv; 2 - în șablonul de purtător. Sistemele de testare din primul grup conțin medii nutritive dehidrogenate stabilizate cu alcool polivinilic în godeuri de microvolum ale plăcilor de polistiren, de exemplu, API-20E, Enterotest (Fig. 3.5), PBDE domestic și MMTE 1 și E2.

Orez. 3.5.

Sistemele de testare ale celui de-al doilea grup au un substrat și un indicator într-un șablon suport de hârtie sau polimer, de exemplu, Micro-ID, Minitek. Au fost dezvoltate și sisteme de testare bazate pe medii diferențiale lichide, care pot fi produse direct în laboratoare. Pe baza rezultatelor testelor biochimice, tipul de microorganism se stabilește cu ajutorul tabelelor de identificare, a unui catalog analitic de coduri sau a dispozitivelor pentru sisteme microbiologice automatizate de identificare biochimică a microorganismelor. Datorită accelerării cercetării și eficienței ridicate, sistemele de testare în microvolum sunt utilizate pe scară largă în laboratoare.

Pentru mediile nutritive naturale se folosesc produse animale, vegetale și microbiene: carne, făină de pește, lapte, ouă, sânge, cartofi, drojdie etc. Din acestea se prepară semifabricate: infuzii și extracte (apă de carne, extract de drojdie) , hidrolizate enzimatice și acide (peptonă, Hottinger's digest, casein digest etc.). Infuziile și extractele sunt o sursă de factori de creștere, hidrolizatele sunt o sursă de aminoacizi și alți nutrienți organici.

Agar-agar sau gelatina este folosită ca sigilant pentru mediile nutritive. Agar-agar este o polizaharidă obținută din alge marine. Este capabil să formeze un gel în apă care se topește la 80-86 °C și gelifică la 40-45 °C; nu sunt defalcate de majoritatea tipurilor de microorganisme. Gelatina este o proteină obținută din piele și oase; gel de gelatină se topește la 32-34 °C, geluri la 26-28 °C (adică la o temperatură de incubare de 37 °C este în stare lichidă); defalcate de mai multe tipuri de microorganisme. Prin urmare, gelatina este rar folosită.

Dacă este necesar, clarificați mediul nutritiv tratându-l cu proteine. ou de gaina, ser sau precipitare. Se toarnă mediul în baloane, flacoane și eprubete. Utilizați recipiente curate, nesterile dacă mediul urmează să fie sterilizat la 120 °C, sau steril dacă mediul necesită sterilizare cu abur curgător (100 °C) sau la 112 °C. Închideți recipientul cu mediul cu dopuri din tifon de bumbac și capace de hârtie. În funcție de compoziția mediului, se sterilizează în diverse moduri. Mediile de agar care nu conțin carbohidrați și proteine native, precum și mediile sintetice, sunt sterilizate într-o autoclavă la 115-120 °C timp de 15-20 de minute. Mediile care conțin carbohidrați, lapte, gelatină sunt sterilizate cu abur curgător la 100 °C în fracțiuni sau într-o autoclavă la 112 °C timp de 15 minute. Mediile care conțin proteine native, ureea sunt sterilizate prin filtrare sau componentele sterile (sânge, ser etc.) sunt adăugate la baza sterilă a mediului. Mediile nutritive sterile gata preparate sunt supuse controlului sterilității prin păstrarea lor într-un termostat la 37 °C timp de 1-3 zile.

În teren, este mai ușor să se pregătească medii nutritive din medii nutritive uscate (conserve). O probă din mediul uscat indicat pe etichetă se adaugă în apă distilată sau de la robinet și se fierbe până când pulberea este complet dizolvată. Apoi mediul este turnat în baloane și eprubete sterile și sterilizat. Unele medii (de exemplu, Endo, Ploskireva, Levin) pot fi utilizate fără sterilizare.

Toate seriile de medii nutritive produse industrial și toate loturile de medii preparate în laborator sunt supuse controlului bacteriologic. Tulpinile tipice sau locale de bacterii, tipice din toate punctele de vedere, într-o formă netedă, sunt utilizate ca culturi de testare. Se determină următorii indicatori biologici ai mediului nutritiv: sensibilitate (creștere), proprietăți inhibitoare, proprietăți de diferențiere, rata de creștere a bacteriilor pe mediu, reproductibilitate.

Sensibilitatea mediului nutritiv este determinată de numărul minim de unități formatoare de colonii (CFU) de bacterii care asigură creșterea coloniilor pe mediu, sau de diluția maximă de zece ori a culturii de la o concentrație inițială de 10 unități. turbiditate (conform standardului de turbiditate optică), asigurând apariția creșterii bacteriene pe toate plăcile Petri inoculate. Proprietățile inhibitoare ale mediului sunt evaluate ca grad de suprimare a altor microflore prin valoarea dozei de inoculare în CFU, complet suprimată pe mediu, sau prin raportul dintre numărul de colonii bacteriene crescute și numărul estimat de bacterii inoculate. . Proprietățile de diferențiere ale mediilor sunt studiate prin inocularea speciilor de bacterii testate în amestec cu asociate, urmată de determinarea clarității diferențierii coloniilor bacteriilor dorite de asociate. Specificul proprietății de diferențiere a mediului este relevat de absența acestei proprietăți la alte tipuri de bacterii, cu excepția celor necesare. Viteza de creștere a bacteriilor pe mediu este determinată de timpul minim de incubație al culturilor (în ore), timp în care creșterea clară a culturii vizibilă cu ochiul liber (pentru medii selective) sau formarea de colonii cu caracteristici diferențiale tipice este determinată. asigurat. Reproductibilitatea parametrilor biologici ai mediului este evaluată prin frecvența rezultatelor identice (în%) atunci când mediile sunt reutilizate cu aceleași tulpini de bacterii. Controlul diferitelor medii nutritive pentru indicatorii biologici se efectuează în conformitate cu metode și standarde specifice, ghidate de documente oficiale.

Controlul fizico-chimic al mediilor nutritive în practica de laborator se realizează în ceea ce privește pH-ul, hH și conținutul de azot aminic. Alți indicatori sunt de obicei studiați în producția industrială de medii nutritive. Pentru a determina pH-ul și hH al mediilor, se folosesc pH-metre, hârtii indicatoare și diverși indicatori chimici de pH și hH adăugați la mediul nutritiv. Conținutul de azot aminic este studiat prin titrare pH-metrică cu formol a mediilor nutritive conform GOST.

Studiul proprietăților biochimice ale microorganismelor izolate se realizează în a treia etapă. Cultura de microorganisme crescute pe agar-agar este verificată pentru puritatea prin microscopie a frotiurilor colorate cu Gram. În timpul microscopiei, se acordă atenție formei microbilor, dimensiunii și locației celulei. Petele speciale sunt folosite pentru identificarea sporilor, capsulelor, incluziunilor și flagelilor.

Pentru identificarea culturilor, de ex. stabilirea speciilor și tipului de bacterii, pe lângă caracteristicile morfologice și culturale, sunt studiate proprietăți biochimice, antigenice și de altă natură.